Kit PCR TIANcombi Lyse & Det

Pemurnian DNA dengan cepat dari pelbagai bahan untuk pengesanan PCR.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit menggunakan reka bentuk pembungkusan unik yang merangkumi semua reagen untuk penyediaan DNA genomik yang cepat dan penguatan PCR. Ini berlaku untuk pemurnian DNA genom satu langkah dari berbagai sampel (tisu tumbuhan, biji, tisu haiwan, darah, ragi dan bakteria) dan penguatan dan pengesanan PCR berikutnya. Pembuangan protein, RNA dan metabolit sekunder yang lain, pengekstrakan pelarut organik serta langkah pemendakan etanol tidak diperlukan dalam keseluruhan proses pembersihan, menjadikan operasi ini mudah dan cepat. Kualiti produk stabil dan boleh dipercayai.

Mastermaster 2 × Det PCR yang disediakan oleh kit ini adalah reagen PCR yang sangat serasi yang dapat menguatkan DNA dengan cekap dan khusus tanpa perlu menghilangkan kekotoran seperti protein. Reagen ini mengandungi Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, penyangga, serta penambah, pengoptimum dan penstabil untuk tindak balas PCR. Penggunaan reagen menjadikan tindak balas PCR cepat, sederhana, sensitif, spesifik dan stabil. Oleh itu, kit ini sangat sesuai untuk penyaringan throughput tinggi.

Kucing. Tidak Saiz Pembungkusan
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Perincian Produk

Contoh Eksperimental

Soalan Lazim

Teg Produk

ciri-ciri

■ Mudah dan pantas: DNA dari pelbagai tisu dapat diekstraksi dalam 5 minit tanpa memerlukan pengisaran nitrogen cair.
■ Aplikasi yang luas: Berlaku untuk daun tumbuhan, biji, tisu haiwan, sampel darah (darah segar, antikoagulasi, gumpalan darah, bintik darah kering, dll.), Ragi dan bakteria.
■ Keserasian yang kuat: Reagen PCR sesuai untuk penguatan DNA yang diekstrak dari pelbagai sumber sampel.

Permohonan

■ Pengesanan gen: Pilihan yang sesuai untuk pengesanan gen berskala besar.

Nota PENTING

■ Untuk sampel yang mengandungi fenol tahap tinggi, seperti daun kapas, jumlah input sampel mestilah kurang dari 0.4 mg, jika tidak, reaksi PCR akan terjejas.

Semua produk boleh disesuaikan untuk ODM / OEM. Untuk keterangan,sila klik Perkhidmatan Tersuai (ODM / OEM)


  • Sebelumnya:
  • Seterusnya:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNA diekstrak dari 5 mg daun dan biji jagung, gandum, beras, kedelai dan kapas, masing-masing. DNA diperkuat dengan PCR menggunakan primer tertentu. 6 μl DNA dari jumlah 20 µl eluen dimuat setiap jalur.
    1: Genom kawalan positif; 2: meninggalkan sampel; 3: sampel biji; 4: NTC; Primer D2000
    Experimental Example M: Penanda TIANGEN D2000; 1: kawalan positif;
    2-7: Bilangan bintik darah kering pada kertas turas masing-masing 1-6; 8: Kawalan negatif.
    Pukul 3 mm digunakan untuk mengambil bintik-bintik darah kering dari kertas turas sebagai bahan untuk ujian pengekstrakan.
    6 μl DNA dari jumlah 20 µl eluen dimuat setiap jalur.
    Experimental Exampl M: Penanda TIANGEN D2000; 1: Kawalan positif (DNA genomik digunakan sebagai templat); 2-7: Jumlah darah yang ditambahkan masing-masing adalah 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl dan 60 μl; 8-13: Jumlah darah yang ditambahkan masing-masing adalah 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl dan 60 μl; 14: NTC.
    6 μl DNA dari jumlah 20 µl eluen dimasukkan ke gel agarose.
    S: Tiada jalur penguat

    Templat A-1

    ■ Templat mengandungi kekotoran protein atau perencat Taq, dan lain-lain —— Sucikan templat DNA, keluarkan kotoran protein atau ekstrak DNA templat dengan alat penulenan.

    ■ Denaturasi templat tidak lengkap - Menambah suhu denaturasi dengan tepat dan memanjangkan masa denaturasi.

    ■ Kerosakan templat ——Menyiapkan semula templat.

    Primer A-2

    ■ Kualiti primer yang buruk ——Menyusun semula primer.

    ■ Degradasi primer ——Ambilkan primer berkepekatan tinggi menjadi sedikit untuk pengawetan. Elakkan pembekuan dan pencairan berulang atau jangka panjang 4 ° C.

    ■ Reka bentuk primer yang tidak betul (mis. Panjang primer tidak mencukupi, dimer terbentuk antara primer, dll.) -Perancangan reka bentuk semula (elakkan pembentukan dimer primer dan struktur sekunder)

    A-3 Mg2+kepekatan

    ■ Mg2+ kepekatan terlalu rendah —— Meningkatkan Mg dengan betul2+ kepekatan: Mengoptimumkan Mg2+ kepekatan oleh rangkaian tindak balas dari 1 mM hingga 3 mM dengan selang 0.5 mM untuk menentukan Mg optimum2+ kepekatan untuk setiap templat dan buku asas.

    A-4 Suhu penyepuhlindapan

    ■ Suhu penyepuhlindapan yang tinggi mempengaruhi pengikatan primer dan templat. ——Mengurangkan suhu penyepuhlindapan dan mengoptimumkan keadaan dengan kecerunan 2 ° C.

    Masa lanjutan A-5

    ■ Masa perpanjangan yang pendek —— Menambah masa lanjutan.

    S: Positif palsu

    Fenomena: Sampel negatif juga menunjukkan jalur urutan sasaran.

    A-1 Pencemaran PCR

    ■ Pencemaran silang dari urutan sasaran atau produk penguat ——Hati-hati untuk tidak memasukkan sampel yang mengandungi urutan sasaran dalam sampel negatif atau menumpahkannya keluar dari tabung empar. Reagen atau peralatan harus ditutup secara autoklaf untuk menghilangkan asid nukleik yang ada, dan keberadaan pencemaran harus ditentukan melalui eksperimen kawalan negatif.

    ■ Pencemaran reagen ——Aliot reagen dan simpan pada suhu rendah.

    A-2 Perdanar

    ■ Mg2+ kepekatan terlalu rendah —— Meningkatkan Mg dengan betul2+ kepekatan: Mengoptimumkan Mg2+ kepekatan oleh rangkaian tindak balas dari 1 mM hingga 3 mM dengan selang 0.5 mM untuk menentukan Mg optimum2+ kepekatan untuk setiap templat dan buku asas.

    ■ Reka bentuk primer yang tidak betul, dan urutan sasaran mempunyai homologi dengan urutan bukan sasaran. --— Reka bentuk primer.

    S: Penguatan tidak spesifik

    Fenomena: Jalur penguat PCR tidak konsisten dengan ukuran yang diharapkan, sama ada besar atau kecil, atau kadang-kadang kedua-dua jalur penguat khusus dan jalur penguat tidak spesifik berlaku.

    Primer A-1

    ■ Kekhususan primer yang lemah

    --— Reka bentuk semula primer.

    ■ Kepekatan primer terlalu tinggi ——Meningkatkan suhu denaturasi dengan betul dan memanjangkan masa denaturasi.

    A-2 Mg2+ kepekatan

    ■ Majlis2+ kepekatan terlalu tinggi ——Mengurangkan kepekatan Mg2 + dengan betul: Optimumkan Mg2+ kepekatan oleh rangkaian tindak balas dari 1 mM hingga 3 mM dengan selang 0.5 mM untuk menentukan Mg optimum2+ kepekatan untuk setiap templat dan buku asas.

    A-3 Polimerase termostabil

    ■ Jumlah enzim yang berlebihan ——Mengurangkan jumlah enzim dengan tepat pada selang 0,5 U.

    A-4 Suhu penyepuhlindapan

    ■ Suhu penyepuhlindapan terlalu rendah - Menambah suhu penyepuhlindapan dengan tepat atau menggunakan kaedah penyepuhlindapan dua peringkat

    Kitaran PCR A-5

    ■ Terlalu banyak kitaran PCR ——Mengurangkan bilangan kitaran PCR.

    S: Jalur tambalan atau smear

    Primer A-1- Kekhususan yang buruk - Merancang semula primer, mengubah kedudukan dan panjang primer untuk meningkatkan kekhususannya; atau melakukan PCR bersarang.

    DNA Templat A-2

    —— Templat itu tidak tulen ——Purnikan templat atau ekstrak DNA dengan alat pemurnian.

    A-3 Mg2+ kepekatan

    ——Mg2+ kepekatan terlalu tinggi ——Mengurangkan Mg dengan betul2+ kepekatan: Mengoptimumkan Mg2+ kepekatan oleh rangkaian tindak balas dari 1 mM hingga 3 mM dengan selang 0.5 mM untuk menentukan Mg optimum2+ kepekatan untuk setiap templat dan buku asas.

    A-4 dNTP

    ——Kepekatan dNTP terlalu tinggi ——Kurangkan kepekatan dNTP dengan betul

    A-5 Suhu penyepuhlindapan

    - Suhu penyepuhlindapan yang terlalu rendah - Menambah suhu penyepuhlindapan dengan tepat

    Kitaran A-6

    —— Terlalu banyak kitaran ——Mengoptimumkan nombor kitaran

    S: Berapa banyak DNA templat yang harus ditambahkan dalam sistem reaksi PCR 50 μl?
    ytry
    S: Bagaimana menguatkan serpihan panjang?

    Langkah pertama adalah memilih polimerase yang sesuai. Polimerase Taq biasa tidak dapat dikoreksi kerana kekurangan aktiviti eksonuklease 3'-5 ', dan ketidakcocokan akan mengurangkan kecekapan pemanjangan serpihan. Oleh itu, polimerase Taq biasa tidak dapat memperkuat serpihan sasaran yang lebih besar daripada 5 kb. Taq polimerase dengan pengubahsuaian khas atau polimerase kesetiaan tinggi lain harus dipilih untuk meningkatkan kecekapan pemanjangan dan memenuhi keperluan penguatan serpihan panjang. Sebagai tambahan, penguatan serpihan panjang juga memerlukan penyesuaian reka bentuk primer, waktu denaturasi, masa perpanjangan, pH penyangga, dan lain-lain. Biasanya, primer dengan 18-24 bp dapat menghasilkan hasil yang lebih baik. Untuk mengelakkan kerosakan templat, waktu denaturasi pada suhu 94 ° C harus dikurangkan menjadi 30 saat atau kurang setiap kitaran, dan waktu untuk menaikkan suhu hingga 94 ° C sebelum penguatan harus kurang dari 1 menit. Lebih-lebih lagi, menetapkan suhu perpanjangan sekitar 68 ° C dan merancang masa lanjutan mengikut kadar 1 kb / min dapat memastikan penguatan serpihan panjang yang berkesan.

    S: Bagaimana meningkatkan kesetiaan pengukuhan PCR?

    Kadar kesalahan penguatan PCR dapat dikurangkan dengan menggunakan pelbagai polimerase DNA dengan kesetiaan yang tinggi. Di antara semua polimerase DNA Taq yang dijumpai setakat ini, enzim Pfu mempunyai kadar ralat terendah dan kesetiaan tertinggi (lihat jadual terlampir). Sebagai tambahan kepada pemilihan enzim, penyelidik dapat mengurangkan kadar mutasi PCR dengan mengoptimumkan keadaan reaksi, termasuk mengoptimumkan komposisi penyangga, kepekatan polimerase termostabil dan mengoptimumkan bilangan kitaran PCR.

    Tuliskan mesej anda di sini dan hantarkan kepada kami